巨噬细胞产生NO.和O_2~-自由基的分子机理

建立了用顺磁共振（ＥＳＲ）和化学发光技术测定巨噬细胞产生ＮＯ和氧自由基的方法．捕捉到了巨噬细胞受佛波酯刺激产生的ＮＯ．和Ｏ－２自由基．测定了在不同浓度Ｌ－精氨酸存在时佛波酯刺激后巨噬细胞产生的ＮＯ自由基．研究了巨噬细胞产生的ＮＯ和氧自由基的分子机理．结果表明巨噬细胞不仅产生氧自由基而且产生ＮＯ自由基．ＮＡＤＰＨ氧化酶产生氧自由基的部位位于巨噬细胞膜的外侧．ＮＯ合成酶活化产生ＮＯ自由基比ＮＡＤＰＨ氧化酶活化产生氧自由基晚几分钟．     

含翻译增强子的表达载体pSC34的构建及初步应用

１９８８年Ｏｌｉｎｓ［１］发现Ｔ７噬菌体基因１０的先导序列（Ｔ７ｇ１０Ｌ）具有明显的促进基因翻译的作用．本文构建了含Ｔ７ｇ１０Ｌ的表达载体ｐＳＣ３４,并尝试表达了几个不同类型的基因．１材料与方法１．１菌株大肠杆菌菌株ＴＡＰ１０６为本室储存．ＴＡＰ１０...     

寡聚脱氧核苷酸的结构与抗降解特性的研究

合成了４段具有不同高级结构或不同修饰的寡聚脱氧核苷酸,检查它们在２０％血清中的稳定性．发现：（１）寡核苷酸主要被血清中的３′外切核酸酶降解,未经修饰的线性寡核苷酸降解严重;（２）末端部分硫代修饰的寡核苷酸稳定性明显提高;（３）自身互补形成的配对结构可有效保护３′末端．具有４个以上（含４个）ＧＣ对的３′端发夹结构寡核苷酸,其抗核酸酶的能力几乎与硫代修饰的寡核苷酸相当．     

PCR-SSP技术对广东汉族人HLA-DR基因分型

探索具有高分辨率、高特异性和简捷快速的方法对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型,为临床器官移植配型和疾病相关性分析提供实用的方法和基础资料．利用ＤＲ１～ＤＲｗ１８序列特异性的１９组引物及１对内参照引物进行ＰＣＲ扩增即ＰＣＲ－ＳＳＰ对ＨＬＡ－ＤＲ进行基因分型,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,溴乙锭染色,在紫外光下观察分型结果．每个被检个体的ＤＲ型别可由特异引物扩增出现的电泳谱带直接判断．双盲检测２２例的结果１００％正确．在１０２例中国广东地区汉族人中,ＤＲ９和ＤＲ２的基因频率最高,分别为０．２２０５和０．１９１２,ＤＲ１０为最低（０．００９８）．与用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法分型获得的结果比较,基因型别分布基本一致,但一些等位基因的频率有差异,表明ＨＬＡ－ＤＲ基因频率的分布在不同地区、不同种族的人群间存在着差异．ＰＣＲ－ＳＳＰ法分辨率和特异性虽不及ＰＣＲ－ＳＳＯ法但比血清学方法精细,分型的全过程只需２～４ｈ能满足临床器官移植配型的要求．基因频率调查结果为器官移植配型和疾病相关性分析提供了基础资料．     

磷酸钙法对哺乳动物非贴壁细胞的质粒共转染

对一种哺乳动物的非贴壁细胞Bal b/c近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株P815进行了G418敏感浓度及甘油耐受性的测定;并通过磷酸钙法用含HBVS基因的质粒pRc/CMVS与含筛选标记基因neo的质粒pSV_2-neo进行了共转染。经G418筛选,获得了G418抗性细胞P851-S,在G418选择压力下,已连续筛选80余天,传代12次;斑点杂交和ELISA实验分别表明P815-S细胞内有HBVS基因的存在,培养上清中有HBsAg的表达。     

杜氏盐藻(Dunalielle salina)盐适应相关蛋白

观察不同盐浓度培养液中生长的杜氏盐藻可溶性蛋白SDS-PAG图谱,发现高盐与低盐相比,其51kD和63kD蛋白含量高,而23kD的蛋白含量则低。高渗骤变后,51kD蛋白的含量减少,而23kD蛋白的含量增加两倍或两倍以上,骤变23h后含量增加已非常明显;低渗骤变后24h,51kD和23kD蛋白的含量变化不明显。另外,有一分子量约为26kD的蛋白在高盐下易降解。分析了这些蛋白与社氏盐藻渗透调节的可能关系。     

树载脂蛋白CIcDNA序列及其组织表达

分离提取树（ｔｒｅｅｓｈｒｅｗ,ＴＳ）肝组织ｍＲＮＡ,以此为模板,反转录构建了ＴＳ肝组织ｃＤＮＡ文库。利用制备的兔抗ＴＳ载脂蛋白ＣＩ多抗血清为探针筛选该文库,获得两个阳性克隆。测序及序列分析表明：两个克隆均为ＴＳａｐｏＣＩｃＤＮＡ基因。大的克隆由３８０个核苷酸构成,包括２１ｂｐ、９５ｂｐ组成的５′和３′非编码区,２６４ｂｐ组成的一个完整开放阅读框架,编码８８个氨基酸的ａｐｏＣＩ前体,含２６个氨基酸构成的信号肽和６２肽的成熟蛋白。其成熟肽长度与大鼠、小鼠和狗的相应结构一致,但较人和狒狒ａｐｏＣＩ的成熟肽多５个氨基酸。并对其功能域进行了初步预测。ＲＮＡ印迹显示ＴＳａｐｏＣＩｍＲＮＡ不仅主要在肝组织表达;而且不同于人和其他哺乳类动物,亦可少量在小肠表达。上述结果为进一步研究ＴＳａｐｏＣＩ基因组结构、功能和体外表达奠定了基础。     

水稻(Oryza sativa)原生质体经钝化后诱导融合再生可育体细胞杂种

本研究在初步实现水稻原生质体培养的程序化后,选用普通栽培稻P339和特种稻苏御糯选的原生质体为融合亲本,利用碘乙酸(IA)和罗丹明-6G(R-6G)这两个代谢互补抑制剂钝化处理亲本原生质体,确定了合适的抑制条件。P339用0.25mmol/L IA,苏御糯选用50μg/ml R-6G分别经30min钝化处理,通过PEG和高Ca~(2 )、高pH法诱导融合,异源融合体具有代谢互补效应,经培养得到愈伤组织17块,并进一步分化获得不同形态的再生植株12棵。移栽存活的再生植株成熟后可育,通过对这些植株的形态以及酯酶和过氧化物酶同工酶电泳的分析表明是融合后的体细胞杂种植株。     

人造血干/祖细胞多态性的研究:Ⅺ.人正常骨髓CD34~ 造血细胞周期动力学相关大分子DNA、RNA和PRO含量的分析

DNA、RNA和PRO的合成、积累及相互关系是调控细胞周期动力学最主要的三个参数。同时检测这些组成部分能够更精确细致地评判细胞的周期动力学特征。本文探索了人正常骨髓CD34~ 造血细胞周期动力学相关大分子DNA、RNA和PRO的含量,以便认识CD34~ 造血细胞周期动力学的特征。用新型CIMS-100免疫磁性分离系统高效富集人骨髓CD34~ 造血细胞,经FCM及APAAP鉴定,富集的CD34~ 造血细胞的纯度达90～95%。随之采用碘化丙啶(PI)、派若宁Y(PY)及异硫氰荧光素(FITC)分别进行标记DNA、RNA和PRO并在FCM上检测。结果表明,DNA、RNA和PRO在CD34~ 造血细胞中的含量明显低于单个核细胞,分别仅占后者的34±3%、48±21%及62±14%。结合我们以往的结果,我们认为CD34~ 造血细胞的确是一独特的体细胞群,不仅表现在重建造血与免疫学功能上,而且表现在细胞周期动力学上。据我们所知,这是目前国际上首次有关人CD34~ 造血细胞周期动力学相关大分子的系统分析报道,提供了大多数CD34~ 造血细胞处于静止期的直接证据。